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PVDF膜
    剛開始做WB的人也許會(huì)有這種疑問(wèn)：為什么實(shí)驗(yàn)室的老師（或者師兄師姐們）在教我們做WB的時(shí)候，如果是用PVDF膜做，總是小心翼翼的剪，節(jié)省著用，甚至一些邊邊角角也舍不得丟掉呢？其實(shí)，這不僅是因?yàn)镻VDF膜比較貴，還由于PVDF膜是做WB的“*”。

    聚偏二氟乙烯（PVDF）膜作為基質(zhì)的轉(zhuǎn)印膜由Millipore公司在1985年首先推出。與硝酸纖維素膜相比，PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力，機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都更*的性能（Pluskal,et al.,1986）。市售硝酸纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2（而結(jié)合強(qiáng)度PVDF比硝纖膜強(qiáng)6倍！）。在艾滋病毒（HIV）血清學(xué)檢驗(yàn)中直接比較PVDF和硝酸纖維素膜，PVDF膜具有更好的截留總HIV抗原能力并提高抗體檢測(cè)糖基化被膜抗原的性能。但是PVDF膜zui大的優(yōu)點(diǎn)不僅于此：更好的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測(cè)中成為理想選擇；而且單個(gè)凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的，如考馬斯亮藍(lán)染色后切出條帶并進(jìn)行N-末端測(cè)序、蛋白消化/肽分離/內(nèi)部測(cè)序和免疫檢測(cè)（Kurien,et al.,2003）。特別是需要做N端蛋白測(cè)序，在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下，當(dāng)尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測(cè)序的*選擇。此外，個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，一些強(qiáng)疏水蛋白用PVDF膜效果會(huì)更好一些。PVDF膜適用的檢測(cè)方法也不少，化學(xué)發(fā)光、常規(guī)顯色、同位素和標(biāo)準(zhǔn)染色都一樣OK，但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理（不超過(guò)15秒）再用緩沖液平衡，才能用，而且適用過(guò)程中萬(wàn)一干了也要同樣程序再處理（不過(guò)要真出現(xiàn)這種問(wèn)題也是自己欠扁，誰(shuí)要你不小心呢，轉(zhuǎn)膜前處理也就罷了，轉(zhuǎn)膜后再這樣處理可能會(huì)影響后繼的抗體識(shí)別呢）。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的，后者孔徑小，對(duì)小分子蛋白有較好的攔截吸附，背景可能會(huì)比前者稍高。

PVDF膜常見的有以下幾個(gè)品牌

    作為PVDF膜的*，Millipore公司的PVDF膜Immobilon系列分為Immobilon-P（0.45um）, -PSQ（0.2um）, -FL（用于熒光顯色）和Blotting Sandwiches for High Troughput四種。Immobilon-P膜孔徑均一，具有*的吸附能力，染色性能好、抗溶劑能力強(qiáng)和信噪比高，有助于提高檢測(cè)靈敏度，而且開放的孔結(jié)構(gòu)容易接近被吸附的蛋白質(zhì)，并有助于去除背景上沒有吸附的探針，可以說(shuō)是免疫印跡檢測(cè)理想的印跡膜。Immobilon-PSQ轉(zhuǎn)印膜是印跡小分子蛋白質(zhì)（<20KDa）的理想選擇——優(yōu)良的蛋白質(zhì)吸附性能，滲漏少。內(nèi)表面面積較大，可供蛋白質(zhì)吸附從而提高蛋白質(zhì)測(cè)序的得率。由于不含污染性支撐物或表面活性劑，Immobilon-PSQ層析譜上的背景峰值極小。Immobilon-FL也是Millipore值得驕傲的產(chǎn)品，因?yàn)檫@是*個(gè)專門為熒光顯色優(yōu)化的轉(zhuǎn)移膜。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，這種膜在Kodak成像系統(tǒng)可以顯示僅7ng的蛋白，聽起來(lái)不錯(cuò)吧，有興趣可以試一試。這幾種膜除了一般的PVDF膜的優(yōu)點(diǎn)之外，zui大特點(diǎn)就是一個(gè)字——快。按照Millipore的操作手冊(cè)，Immobilon可以在保證質(zhì)量的前提下縮短WB時(shí)間到2個(gè)小時(shí)——主要是縮短封閉和洗脫時(shí)間。這可真是個(gè)好消息，因?yàn)樽谀莾旱萕B結(jié)果多浪費(fèi)時(shí)間啊！縮短這個(gè)費(fèi)時(shí)而枯燥的過(guò)程，早出結(jié)果，可以提高實(shí)驗(yàn)效率，利于我們分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，考慮下步對(duì)策嘛。卷膜經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，裁剪剩下的邊角料還可以用來(lái)做點(diǎn)雜交，而預(yù)裁剪的即用膜更適合高通量等等“用金錢換時(shí)間”的實(shí)驗(yàn)。再次強(qiáng)調(diào)的是，疏水PVDF膜在用前必須經(jīng)過(guò)50%或以上體積比的甲醇或者乙醇溶液處理幾分鐘，待膜變成半透明后用MilliQ水或者純水漂洗一下，轉(zhuǎn)入電泳緩沖液平衡才能用。